组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌细胞中ERα表达的影响(2)
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1.2实验方法及步骤
1.2.1绘制细胞生长曲线：首先待一个100 ml培养瓶内的贴壁细胞生长至约70%~80%，将其消化并制成细胞悬液，由细胞悬液中抽取10 μl点入细胞计数板内计数得出每毫升细胞悬液内的细胞数，然后根据每孔需要种入的细胞数目再次稀释，接种入24孔板的18孔。从次日开始每日计数3孔取均数，连续6 d，即可绘制出细胞生长曲线。
1.2.2绘制乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7在不同浓度MS-275作用下细胞的生长抑制率(MTT法)。选择合适的药物浓度组细胞进行下一步实验。取对数期生长的MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞分别用培养基制成单细胞悬液，以固定浓度接种于96孔培养板内，观察细胞贴壁且生长良好后，用无血清培养液同步化24 小时，加入终浓度0.25、0.5、1、2.5 μmol/L的MS-275作为实验组，另外加入与实验组等量的DMSO作为阴性对照组，细胞培养液不加细胞作为空白对照，各设5个复孔分别继续培养24、48、72、96、120 h后行MTT检测，根据数据绘制药物干预后的细胞生长曲线。
1.2.3选择1.0 μmol/L浓度MS-275作用48 h，检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7中药物处理前后ERαmRNA的表达。RT-PCR：ERα上游引物5′TGGTCCAGCTCCCACTCGCT-3，下游引物5′TGAGACACCAGTGCATTCACTG-3′。RT-PCR使用10 μl反应体系，变性温度为55 ℃，产物长度482 bp。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶分析系统观察拍照。
1.2.4流式细胞分析以1.0 μmol/L的MS-275处理48 h后的两种乳腺癌细胞株分为处理组，对照组(非加药和加DMSO组)，上机进行流式细胞学分析。
1.3统计学方法数据均以均数±标准差(x±s)表示,用SPSS 12 ......
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